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ZBTB1CRISPR激活质粒(h) | sc-411630-ACT | 20 µg | CNY2986.00 | |||
ZBTB1CRISPR激活质粒(h2) | sc-411630-ACT-2 | 20 µg | CNY2986.00 |
ZBTB1(含锌指与 BTB 结构域蛋白 1)编码一种转录调控因子,通过整合 BTB/POZ 介导的蛋白相互作用与 C2H2 锌指的 DNA 结合能力,塑造谱系特异性与情境特异性的基因表达程序。在造血与免疫细胞生物学中,ZBTB1 被认为参与调控分化、增殖和基因组稳定性,将转录调控与 DNA 损伤应答以及染色质状态维持联系起来。ZBTB1 活性异常可扰乱控制淋巴系发育与应激反应的调控网络,因此与免疫缺陷样表型、血液系统调控异常以及致癌性转录回路的研究相关。作为一种核内因子,ZBTB1 常用于转录抑制/激活、染色质组织以及与检查点相关过程的通路绘制研究中。
ZBTB1 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性ZBTB1的表达。
ZBTB1 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的ZBTB1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于ZBTB1转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性ZBTB1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的ZBTB1位点,并能够研究内源性位点上依赖于ZBTB1的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在ZBTB1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟ZBTB1通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。