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XRCC4双切口酶质粒(m) | sc-430821-NIC | 20 µg | $410.00 |
小鼠 Xrcc4 基因编码 XRCC4,这是一种非同源末端连接(NHEJ)通路中的核心支架蛋白。NHEJ 负责修复由电离辐射、氧化应激以及程序性重组事件产生的 DNA 双链断裂。XRCC4 与 DNA 连接酶 IV 形成功能复合物,并与 XLF/NHEJ1 相互作用,以对齐并连接断裂的 DNA 末端,从而维持基因组稳定性并支持正常的细胞周期进程。XRCC4 依赖的末端连接一旦受损,会破坏染色体完整性并提高对基因毒性应激的敏感性,使 XRCC4 的功能与癌症相关的基因组不稳定机制相关联。由于 NHEJ 也是 V(D)J 重排及抗原受体基因多样化所必需的,Xrcc4 同样与免疫系统发育研究密切相关。
XRCC4 双切酶质粒(m)由一对匹配的质粒组成,专为在 mouse 细胞系中对 Xrcc4 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对Xrcc4内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏Xrcc4的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了Xrcc4基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。