WTXCRISPR激活质粒(h2): sc-409039-ACT-2

人类 AMER1 基因编码 WTX 蛋白，这是一种与肿瘤抑制相关的因子，通过促进 β-连环蛋白（β-catenin）的周转并协调“破坏复合体”的各组分来调控经典的 Wnt/β-连环蛋白信号通路。WTX 还参与细胞骨架组织以及细胞—细胞黏附过程，将膜相关的支架作用与对发育程序的转录调控相连接。AMER1 的功能缺失性改变与 Wilms 肿瘤和伴颅骨硬化的条纹状骨病（osteopathia striata with cranial sclerosis）有关，并且在其他多种肿瘤背景中也观察到 AMER1 的破坏；在这些情况下，Wnt 通路失调会驱动异常增殖。针对 AMER1/WTX 的基因编辑与功能扰动工具可用于开展机制研究，解析 Wnt 依赖的转录、发育信号传导，以及肾脏和骨骼模型系统中的基因型—表型关系。

WTX CRISPR激活质粒（h2）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性AMER1的表达。

WTX CRISPR激活质粒（h2）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的AMER1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于AMER1转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性WTX表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的AMER1位点，并能够研究内源性位点上依赖于WTX的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在AMER1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟WTX通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。