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WTAP双切口酶质粒(h) | sc-403767-NIC | 20 µg | CNY3084.00 | |||
WTAP双切口酶质粒(h2) | sc-403767-NIC-2 | 20 µg | CNY3084.00 |
WTAP(Wilms 肿瘤 1 相关蛋白)是由 METTL3 和 METTL14 组成的 mRNA N6-甲基腺苷(m6A)“写入”复合体的核心组分,负责协调转录共发生的 RNA 甲基化过程,从而影响 pre-mRNA 剪接、核输出、翻译以及转录本稳定性。WTAP 通过调控与细胞周期和分化相关的转录本,参与塑造细胞增殖与应激反应的 RNA 加工程序。WTAP 表达或 m6A 通路活性失调与多种癌症及发育相关情境中的基因表达网络改变有关,因此它是表观转录组调控领域被广泛研究的关键节点。因而,对 WTAP 进行功能扰动常用于解析 m6A 依赖机制如何决定转录本命运与细胞表型。
WTAP 双切酶质粒(h)由一对匹配的质粒组成,专为在 human 细胞系中对 WTAP 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对WTAP内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏WTAP的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了WTAP基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。