Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Simultaneous direct near-infrared western blot analysis of Wip1 expression, detected with Wip1 Antibody (F-10) Alexa Fluor® 680: sc-376257 AF680 and GAPDH expression, detected with GAPDH (G-9) Alexa Fluor® 790: sc-365062 AF790 in MCF7 whole cell lysate. Blocked with UltraCruz® Blocking Reagent: sc-516214. Cruz Marker™ Molecular Weight Standards detected with Cruz Marker MW Tag-Alexa Fluor® 790: sc-516731.
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Wip1双切口酶质粒(h): sc-400980-NIC
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- Wip1 双切口酶质粒（h）含有一对质粒，分别编码D10A突变的Cas9核酸酶，和目标特异的 20 nt 向导RNA （gRNA），与其相应的/%base_sku_name%/ CRISPR/Cas9敲除质粒相比，它在基因敲除方面具有更好的特异性
- 成对的向导RNA序列与目标基因中约20个碱基对互补，从而使Cas9可以模仿DNA双链断裂（DSB），介导特异的基因组DNA双切割
- 质粒对中的一个包含供筛选使用的嘌呤霉素抗性基因；另一个包含供观察转染使用的绿色荧光蛋白标记
- Wip1双切酶质粒（h）和Wip1双切酶质粒（h2）编码针对PPM1D的不同配对gRNA设计。其中一种或两种设计可能均有提供
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：Wip1: sc-376257，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
Wip1双切口酶质粒(h) | sc-400980-NIC | 20 µg | CNY3084.00 | |||
Wip1双切口酶质粒(h2) | sc-400980-NIC-2 | 20 µg | CNY3084.00 |
PPM1D 编码 Wip1（PPM1D），一种依赖 Mg2+/Mn2+ 的 Ser/Thr 蛋白磷酸酶，可作为 DNA 损伤信号通路的反馈调节因子。Wip1 通过去磷酸化包括 p53、ATM/ATR 通路组分以及 MAPK 信号节点在内的关键介导分子，削弱应激反应通路，从而调控细胞周期检查点的恢复与细胞凋亡。借由这些作用，PPM1D 影响基因组稳定性、复制应激耐受性以及炎症信号输出。PPM1D/Wip1 活性异常与多种疾病相关情境中的 DNA 修复与检查点控制失衡有关，因此可作为研究基因组完整性机制的重要靶点。
Wip1 双切酶质粒（h）由一对匹配的质粒组成，专为在 human 细胞系中对 PPM1D 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对PPM1D内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时，会产生错位的单链切口，从而共同形成错位双链断裂，这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径（最常见的是非同源末端连接（NHEJ））得到修复，从而导致插入或缺失，进而破坏PPM1D的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合，双切口方法提高了编辑特异性，并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞，其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化，而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集，并简化了PPM1D基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。