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WDR77双切口酶质粒(h) | sc-403890-NIC | 20 µg | CNY3084.00 | |||
WDR77双切口酶质粒(h2) | sc-403890-NIC-2 | 20 µg | CNY3084.00 |
WDR77(亦称 MEP50)编码一种含 WD 重复序列的支架蛋白,是 PRMT5 的必需辅因子,支持对组蛋白及多种 RNA 结合蛋白上的精氨酸残基进行对称性二甲基化。通过这一 PRMT5–WDR77 甲基化复合体(methylosome),WDR77 影响染色质组织、转录调控以及 pre-mRNA 剪接,并进一步作用于细胞周期进程和谱系程序。WDR77 也与雄激素受体的共调控及更广泛的核受体信号传导相关,从而与塑造细胞增殖与分化状态的通路相联系。PRMT5/WDR77 活性失调常在肿瘤生物学与发育相关研究中被重点关注,因为表观遗传与 RNA 加工缺陷会导致基因表达网络异常。
WDR77 双切酶质粒(h)由一对匹配的质粒组成,专为在 human 细胞系中对 WDR77 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对WDR77内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏WDR77的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了WDR77基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。