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WBP2CRISPR激活质粒(h) | sc-409856-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
WBP2(WW 结构域结合蛋白 2)作为一种接头蛋白和转录共调节因子发挥作用,能够与含 WW 结构域的互作伙伴结合,并将多种信号输入整合到基因表达程序中。它参与与受体信号和核内信号相关的通路,包括通过与共激活子复合物相互作用进行转录调控,以及对与增殖和分化相关的转录输出进行调节。WBP2 的活性也常在癌症生物学中与异常信号状态联系起来研究;在此背景下,共调节网络的变化可影响细胞生长与迁移表型。这些特性使 WBP2 成为研究人类细胞中转录线路、信号依赖性基因调控以及情境特异性通路重塑的一个有用节点。
WBP2 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性WBP2的表达。
WBP2 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的WBP2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于WBP2转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性WBP2表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的WBP2位点,并能够研究内源性位点上依赖于WBP2的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在WBP2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟WBP2通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。