VPS4ACRISPR激活质粒(h): sc-402005-ACT
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- VPS4A CRISPER激活质粒（h）是一种协同激活介质（SAM）转录激活系统，目的在于特定上调基因表达
- VPS4A CRISPR 激活质粒 (h)包含三种质量比为1:1:1的质粒：一种质粒编码与转录激活结构域VP64融合的去活化的Cas9 (dCas9)核酸酶(D10A and N863A)，和杀稻瘟素抗性基因；一种质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白，和潮霉素抗性基因；一种质粒编码与两个MS2 RNA适体融合的目标特异的20 nt向导RNA，和嘌呤霉素抗性基因。
- 形成的SAM复合物结合到转录起始位点上游大约200-250 nt的特定位点区域，为高效激活基因提供转录因子的招募
- 由 VPS4A CRISPR 激活质粒 (h) 和 VPS4A CRISPR 激活质粒 (h2) 编码的 gRNA 分别针对 VPS4A 转录起始位点上游的不同调控区域。其中一种或两种设计可能可用
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：VPS4A: sc-393428，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
VPS4ACRISPR激活质粒(h) | sc-402005-ACT | 20 µg | CNY2986.00 | |||
VPS4ACRISPR激活质粒(h2) | sc-402005-ACT-2 | 20 µg | CNY2986.00 |
人类 VPS4A 编码一种 AAA+ ATP 酶，为 ESCRT-III 的解聚与回收提供动力，从而支持多囊泡体（multivesicular body, MVB）生物发生、内体货物分选、细胞分裂末期的断裂（cytokinetic abscission）以及质膜修复等所需的膜重塑事件。VPS4A 的活性与 ESCRT 各组分协同，调控受体下调、外泌体与微囊泡（microvesicle）生物发生，以及有丝分裂后核膜封闭。由于其在内溶酶体运输与膜裂变中的核心作用，VPS4A 常被用于研究影响蛋白稳态（proteostasis）、先天免疫信号传导，以及利用 ESCRT 机制完成出芽的病毒出芽等通路。ESCRT/VPS4 功能失调与神经退行性表型、生长因子信号异常，以及与癌症相关的囊泡运输和细胞分裂改变有关。
VPS4A CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性VPS4A的表达。
VPS4A CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的VPS4A基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于VPS4A转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性VPS4A表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的VPS4A位点，并能够研究内源性位点上依赖于VPS4A的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在VPS4A表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟VPS4A通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。