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VDAC3CRISPR激活质粒(h) | sc-404240-ACT | 20 µg | CNY2986.00 | |||
VDAC3CRISPR激活质粒(h2) | sc-404240-ACT-2 | 20 µg | CNY2986.00 |
VDAC3(电压依赖性阴离子选择性通道蛋白3)是一种位于线粒体外膜的孔蛋白,参与细胞质与线粒体之间的代谢物和离子交换,从而影响氧化磷酸化及细胞能量代谢。作为电压依赖性阴离子通道(VDAC)家族成员之一,它参与调控线粒体膜通透性、氧化还原稳态,并与细胞凋亡信号通路发生串话。研究表明,VDAC3与线粒体质量控制过程及对氧化应激的应答相关,尤其与高能量需求组织密切相关。涉及VDAC3的线粒体运输与信号调控异常,是神经退行性疾病、心代谢功能障碍、不孕不育以及癌症相关代谢重编程研究中的关注重点。
VDAC3 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性VDAC3的表达。
VDAC3 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的VDAC3基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于VDAC3转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性VDAC3表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的VDAC3位点,并能够研究内源性位点上依赖于VDAC3的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在VDAC3表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟VDAC3通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。