Vasohibin-2CRISPR激活质粒(h): sc-407838-ACT

VASH2 编码 Vasohibin-2，它是一种位于细胞质的微管动力学调控因子，作为微管蛋白羧肽酶发挥作用，可生成去酪氨酸化（detyrosinated）的 α-微管蛋白，从而影响纺锤体组织、细胞内运输以及细胞运动能力。通过调控微管翻译后修饰状态，VASH2 参与与细胞周期进程和迁移表型相关的细胞骨架重塑程序。在多种模型体系中，VASH2 表达异常与血管生成相关的信号背景以及肿瘤进展特征有关，支持其作为连接微管调控与血管生物学、侵袭性生物学的机制性节点。上述特性使 VASH2 适用于细胞骨架调控、内皮细胞—肿瘤细胞串扰以及依赖微环境的细胞行为变化等研究方向。

Vasohibin-2 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性VASH2的表达。

Vasohibin-2 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的VASH2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于VASH2转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性Vasohibin-2表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的VASH2位点，并能够研究内源性位点上依赖于Vasohibin-2的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在VASH2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Vasohibin-2通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。