USP43CRISPR激活质粒(h): sc-416563-ACT

人类 USP43 基因编码一种泛素–蛋白酶体系统中的去泛素化酶，能够催化从蛋白底物上移除泛素，从而调控其稳定性、定位以及信号输出。通过精细调节依赖泛素的蛋白质周转，USP43 有望影响细胞周期推进、DNA 损伤应答以及与染色质相关的基因表达调控等核心过程。去泛素化通路的失调常与基因组不稳定和异常增殖表型相关，因此 USP43 是在疾病相关细胞模型中开展机制研究的一个重要节点。对 USP43 依赖的泛素信号进行谱系分析，有助于阐明蛋白质稳态网络如何与应激反应及谱系特异性的转录程序相互衔接。

USP43 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性USP43的表达。

USP43 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的USP43基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于USP43转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性USP43表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的USP43位点，并能够研究内源性位点上依赖于USP43的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在USP43表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟USP43通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。