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UGP2CRISPR激活质粒(h) | sc-408778-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
人类 UGP2 基因编码 UDP-葡萄糖焦磷酸化酶 2(UDP-glucose pyrophosphorylase 2),这是一种细胞质酶,催化由葡萄糖-1-磷酸与 UTP 可逆生成 UDP-葡萄糖的反应,为糖原合成与糖基化提供关键的核苷酸糖前体。通过调控 UDP-葡萄糖的可用性,UGP2 影响碳水化合物流量、蛋白聚糖与糖蛋白的生物合成,以及对营养与应激信号的更广泛代谢适应。UGP2 活性改变与葡萄糖处理受扰、以及细胞外基质和蛋白糖基化模式的变化有关,从而可能影响细胞生长、分化与信号传导。这些功能使 UGP2 成为研究代谢重编程、糖链依赖性调控以及疾病相关细胞模型中基因型—表型关系的一个有用节点。
UGP2 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性UGP2的表达。
UGP2 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的UGP2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于UGP2转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性UGP2表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的UGP2位点,并能够研究内源性位点上依赖于UGP2的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在UGP2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟UGP2通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。