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TRPV4慢病毒激活颗粒(h) | sc-401432-LAC | 200 µl | CNY3422.00 |
TRPV4 编码一种多模态、对 Ca2+ 通透的 TRP 通道,定位于质膜并作为机械感受器和渗透压感受器发挥作用,将物理与化学刺激耦联到细胞内钙信号传导。通道激活可调控膜电位以及 Ca2+ 依赖性通路,从而控制细胞骨架重塑、细胞体积调节和转录反应,包括 MAPK 和 CaMK 依赖的信号级联。TRPV4 活性会影响内皮通透性、伤害感受与炎症信号,以及软骨和骨中的机械转导,使其与水肿、痛觉敏化和骨骼稳态等相关过程相联系。TRPV4 的遗传或功能扰动与一系列神经病理性与骨骼发育不良表型相关,因此是研究刺激诱发的 Ca2+ 动态及其下游基因程序的有用靶点。
TRPV4 慢病毒激活颗粒(h)通过将完整的协同激活介导体(SAM)转录激活系统包装到可直接转导的高滴度慢病毒颗粒中,满足了这一需求,从而能够在更广泛的人类细胞类型中高效上调 TRPV4 表达。
TRPV4 慢病毒激活颗粒(h)通过慢病毒转导递送协同激活介导体(SAM)系统的所有功能组分。该系统包含三种共同转导至靶细胞的颗粒制剂:一种编码与VP64转激活域融合的无催化活性的dCas9(D10A和N863A突变),并携带布拉西定抗性基因; 一种编码MS2-p65-HSF1融合蛋白并携带潮霉素抗性基因的制剂;以及一种编码靶标特异性20 nt sgRNA(与两个MS2 RNA适配体融合)并携带嘌呤霉素抗性基因的制剂。经过慢病毒转导和表达盒的基因组整合后,SAM组分得以稳定表达,并在TRPV4转录起始位点上游的近端启动子区域内的靶位点组装。在此处,VP64、p65和HSF1协同作用,招募内源性转录 machinery,从而驱动内源性TRPV4表达的持续上调。使用无核酸酶活性的 dCas9 可避免引入双链 DNA 断裂,并保留原生的 TRPV4 基因组位点和调控架构。
慢病毒载体具有多项实用优势:稳定的基因组整合支持细胞分裂过程中的可遗传激活;高滴度颗粒制剂免去了内部病毒生产的需要;且与原代细胞、非增殖细胞及转染抗性细胞类型的兼容性,扩大了实验的可及性。可通过嘌呤霉素、潮霉素和布拉西定进行三重抗生素筛选,以确认并富集成功的转导。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。