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TRP1CRISPR激活质粒(h) | sc-400412-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
人类 TYRP1 基因编码酪氨酸酶相关蛋白 1(TRP1)。TRP1 是一种定位于黑素体膜的糖基化酶,在产生色素的细胞中支持真黑素(eumelanin)的合成并促进黑素体成熟。TRP1 与 TYR 和 DCT 一同在黑色素生成网络中发挥作用,影响黑色素中间体的氧化化学反应、黑素体稳定性以及由 MITF 信号等通路调控的色素表型。TYRP1 表达改变或基因变异与色素性疾病相关,并在黑色素瘤生物学研究中受到关注,因为黑色素通路活性的变化会影响细胞应激反应和分化状态。作为与谱系相关的黑色素细胞标志物,TYRP1 常用于研究黑素体生物发生、色素代谢以及调控黑色素细胞功能的转录程序。
TRP1 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性TYRP1的表达。
TRP1 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的TYRP1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于TYRP1转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性TRP1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的TYRP1位点,并能够研究内源性位点上依赖于TRP1的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在TYRP1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟TRP1通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。