TRIM14CRISPR激活质粒(h2): sc-405847-ACT-2

人类TRIM14（tripartite motif-containing 14）编码一种位于细胞质内的TRIM家族衔接蛋白，参与先天免疫调控，通过搭建信号复合体来调节模式识别受体（PRR）下游的I型干扰素诱导以及炎症相关的转录程序；TRIM14通过影响依赖泛素的信号传递，以及调控cGAS–STING、MAVS和NF-κB等通路相关关键介导分子的稳定性或活性，参与抗病毒防御并塑造细胞因子输出与干扰素刺激基因的表达；TRIM14信号失衡与宿主—病原体应答改变及免疫相关病理生理过程有关，包括慢性炎症以及与肿瘤免疫逃逸相关的情境；针对TRIM14的基因编辑与功能基因组学工具可用于支持在人类细胞中对PRR信号、泛素通路串扰以及干扰素驱动的转录网络开展机制研究。

TRIM14 CRISPR激活质粒（h2）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性TRIM14的表达。

TRIM14 CRISPR激活质粒（h2）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的TRIM14基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于TRIM14转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性TRIM14表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的TRIM14位点，并能够研究内源性位点上依赖于TRIM14的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在TRIM14表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟TRIM14通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。