tricellulinCRISPR激活质粒(h): sc-414734-ACT

MARVELD2 编码 tricellulin（又称三细胞连接蛋白），这是一种四次跨膜蛋白，富集于三细胞紧密连接处，即三个位于交界处的上皮细胞相遇的部位。Tricellulin 通过组织连接复合体并调控旁细胞通量，与 claudins、occludin 以及 ZO-1 等支架蛋白协同作用，从而维持上皮和内皮屏障的完整性。借助其在紧密连接组装与细胞极性建立中的作用，MARVELD2 还会影响上皮分化、机械信号转导和组织稳态等过程。MARVELD2 的失调或遗传变异与屏障相关的病理生理改变有关，包括综合征性与非综合征性听力损失，因此对于研究感觉上皮以及连接相关疾病机制具有重要意义。

tricellulin CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性MARVELD2的表达。

tricellulin CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的MARVELD2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于MARVELD2转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性tricellulin表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的MARVELD2位点，并能够研究内源性位点上依赖于tricellulin的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在MARVELD2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟tricellulin通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。