Each CRISPR/Cas9 Knockout (KO) Plasmid product consists of a pool of 3 plasmids designed to ensure identification and cleavage of a specific gene for maximum knockout efficiency. Each plasmid encodes a unique 20 nt sequence derived from the GeCKO (v2) library.
TPMT CRISPR/Cas9 KO质粒 (m): sc-423483
- 针对种属：mouse
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- TPMT CRISPR/Cas9 基因敲除（KO）质粒（m） 是一组质粒混合物，每种质粒均编码 Cas9 核酸酶及针对特定靶点的 20 核苷酸引导 RNA（gRNA），其设计基于 GeCKO v2 文库中的序列，旨在实现最高的基因敲除效率
- gRNA序列引导Cas9在TPMT基因组位点诱导位点特异性双链断裂（DSBs），从而通过非同源末端连接（NHEJ）实现基因敲除
- 嘌呤霉素抗性基因和 RFP 基因两侧有 LoxP 位点，因此在建立稳定的基因敲除细胞系后，可以通过 Cre 重组酶（Cre 向量：sc-418923）去除选择标记。
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
TPMT CRISPR/Cas9 KO质粒 (m) | sc-423483 | 20 µg | CNY2986.00 |
概述
Tpmt 编码硫嘌呤 S-甲基转移酶（TPMT），这是一种位于细胞质、依赖 S-腺苷-L-甲硫氨酸（SAM）的甲基转移酶，催化硫嘌呤及其他含硫底物的 S-甲基化。在小鼠细胞中，TPMT 活性参与外源化合物和核苷酸类似物的代谢，影响细胞内硫鸟嘌呤核苷酸库，并进一步作用于 DNA 复制压力及损伤信号通路。TPMT 功能差异常被用作研究硫嘌呤敏感性决定因素和造血毒性机制的模型，但不意味着具有临床应用。因而，Tpmt 与连接药物生物转化、氧化还原平衡以及增殖组织基因组完整性的相关通路密切相关。
TPMT CRISPR/Cas9 KO质粒（m）是一组旨在针对性地破坏mouse细胞系中Tpmt基因的质粒池。每条质粒均共表达一种独特的单引导RNA（sgRNA），该sgRNA针对Tpmt基因内的特定位点，并携带来自化脓性链球菌的Cas9核酸酶。这些质粒还编码GFP，可通过荧光显微镜或流式细胞术对成功转染的细胞进行荧光标记和富集。
多引导设计提高了在Cas9介导的双链断裂形成后，产生破坏Tpmt开放阅读框的插入或缺失（indels）的概率。CRISPR/Cas9系统引入的DNA断裂通过内源性非同源末端连接（NHEJ）途径修复，通常会导致移码突变，从而使TPMT蛋白表达失活。
该CRISPR敲除系统能够高效构建Tpmt缺失的细胞模型，用于TPMT信号传导研究、功能基因组学研究、癌症生物学研究以及人类细胞系中治疗反应的评估。
主要特点
- 针对对 TPMT 功能至关重要的 Tpmt 外显子的 sgRNA
通过单质粒共表达 SpCas9 和 sgRNA 以简化递送过程
GFP 报告基因用于识别转染细胞
针对多个 Tpmt 基因组位点的质粒池以提高敲除效率
兼容转染递送
设计变体
CRISPRs +/- HDR
- 由 TPMT CRISPR/Cas9 KO 质粒 (m) 和 TPMT CRISPR/Cas9 KO 质粒 (m2) 编码的 gRNA 分别靶向 Tpmt 基因座内的不同位点。可能提供其中一种或两种靶向设计。具体供应情况请参见相关产品。
由 TPMT HDR 质粒（m）编码的 HDR 供体构建体以及 TPMT HDR质粒（m2）编码的HDR供体构建体包含一个嘌呤霉素抗性盒和一个RFP报告基因，其两侧由Tpmt同源臂包围，以支持在与CRISPR/Cas9敲除设计对应的特定Tpmt靶位点进行同源导向修复。HDR供体的供应情况可能有所不同。请查看“相关产品”了解供应情况。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。