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Tom70双切口酶质粒(m) | sc-424331-NIC | 20 µg | CNY3084.00 |
小鼠 Tomm70a 编码 Tom70,这是一种线粒体外膜蛋白导入受体,可识别内部靶向信号,并与分子伴侣协同,将疏水性前体蛋白递送至 TOM 复合体以完成跨膜转运。Tom70 通过促进载体蛋白及其他核编码线粒体组分的导入,维持线粒体蛋白稳态与生物能量生成能力,因此与氧化磷酸化和代谢适应密切相关。扰动 Tom70 依赖的导入过程可引发线粒体应激信号,改变活性氧(ROS)处理,并促使线粒体相关的凋亡与先天免疫通路发生重塑。线粒体蛋白导入及外膜受体功能失调与神经退行性变、心代谢功能障碍以及癌细胞代谢等领域研究的机制相关。
Tom70 双切酶质粒(m)由一对匹配的质粒组成,专为在 mouse 细胞系中对 Tomm70a 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对Tomm70a内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏Tomm70a的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了Tomm70a基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。