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TOB2CRISPR激活质粒(h) | sc-404242-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
人类 TOB2(ERBB2.2 转导因子)编码一种具有抗增殖作用的 BTG/Tob 家族蛋白,可调控 mRNA 周转以及控制细胞周期进程与分化的转录程序。TOB2 通过与 CCR4–NOT 去腺苷酸化酶复合体相互作用参与转录后调控,并可影响 TGF-β/SMAD、MAPK 以及生长因子受体网络等通路下游的信号输出。TOB2 通过塑造即刻早期基因表达与细胞增殖能力,与肿瘤生物学、免疫细胞激活及应激反应型转录调控等研究相关。TOB2 的表达或功能失调与细胞增殖状态的改变有关,并已在癌症相关基因表达特征的研究中受到关注。
TOB2 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性TOB2的表达。
TOB2 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的TOB2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于TOB2转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性TOB2表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的TOB2位点,并能够研究内源性位点上依赖于TOB2的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在TOB2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟TOB2通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。