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TMEM38BCRISPR激活质粒(h) | sc-412461-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
TMEM38B 编码三聚体细胞内阳离子通道 A(TRIC-A),是一种定位于内质网/肌浆网(ER/SR)膜的蛋白,可形成单价阳离子通道,通过提供反离子通量来支持 Ca²⁺ 释放。在以 IP3 受体和雷诺定受体(ryanodine receptor)为依赖的钙信号过程中,TMEM38B 通过稳定 ER/SR 膜电位,参与兴奋–收缩耦联、细胞内钙稳态维持以及下游由钙调控的转录程序。TMEM38B 功能受损与骨骼发育和结缔组织完整性相关;其功能缺失变体与类似成骨不全症的表型有关。这些特点使 TMEM38B 成为在人类细胞中研究 ER 钙处理机制、细胞外基质生物学以及应激相关信号反应的重要对象。
TMEM38B CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性TMEM38B的表达。
TMEM38B CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的TMEM38B基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于TMEM38B转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性TMEM38B表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的TMEM38B位点,并能够研究内源性位点上依赖于TMEM38B的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在TMEM38B表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟TMEM38B通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。