TMEM215CRISPR激活质粒(h2): sc-408002-ACT-2

人类 TMEM215 基因编码跨膜蛋白 215，这是一种预测具有多次跨膜结构的膜蛋白，推测定位于细胞膜等细胞膜系统中，可能参与膜结构组织、与转运相关的过程或依赖信号通路的细胞稳态调控。尽管目前对 TMEM215 的功能认识仍不完全，但表达谱与遗传关联数据已将其与细胞增殖、分化及应激反应等相关通路联系起来，提示其在不同组织生理过程中可能具有情境依赖性的作用。在包括癌症及其他复杂疾病在内的疾病相关数据集中，已有研究报道 TMEM215 的表达模式发生改变，这也支持其作为研究膜蛋白生物学的功能基因组学靶点的潜在价值。通过对 TMEM215 进行基因编辑，可实现敲除或过表达等功能获得/缺失研究，用于在人源细胞模型中解析其亚细胞定位、蛋白—蛋白相互作用，以及下游转录变化或表型效应。

TMEM215 CRISPR激活质粒（h2）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性TMEM215的表达。

TMEM215 CRISPR激活质粒（h2）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的TMEM215基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于TMEM215转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性TMEM215表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的TMEM215位点，并能够研究内源性位点上依赖于TMEM215的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在TMEM215表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟TMEM215通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。