The Double Nickase Plasmid features a U6 promoter for sgRNA expression, a 20 nt targeting sequence, and a gRNA scaffold to guide Cas9n. It includes a CBh promoter for Cas9n (D10A) and puromycin resistance, GFP for transfection verification, and nuclear localization signals (NLS). The 2A peptide allows co-expression of Cas9n and Puro from a single promoter, enabling precise genome editing with reduced off-target effects.
TMEM19双切口酶质粒(h): sc-412500-NIC
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- TMEM19 双切口酶质粒（h）含有一对质粒，分别编码D10A突变的Cas9核酸酶，和目标特异的 20 nt 向导RNA （gRNA），与其相应的/%base_sku_name%/ CRISPR/Cas9敲除质粒相比，它在基因敲除方面具有更好的特异性
- 成对的向导RNA序列与目标基因中约20个碱基对互补，从而使Cas9可以模仿DNA双链断裂（DSB），介导特异的基因组DNA双切割
- 质粒对中的一个包含供筛选使用的嘌呤霉素抗性基因；另一个包含供观察转染使用的绿色荧光蛋白标记
- TMEM19双切酶质粒（h）和TMEM19双切酶质粒（h2）编码针对TMEM19的不同配对gRNA设计。其中一种或两种设计可能均有提供
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| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
TMEM19双切口酶质粒(h) | sc-412500-NIC | 20 µg | $410.00 |
TMEM19 编码一种预测的多跨膜跨膜蛋白，定位于细胞内膜性细胞器，被认为参与膜结构的组织与蛋白运输过程。尽管其分子互作伙伴尚未完全明确，TMEM19 的表达已被发现与细胞生长程序的调控相关，并可能与协调细胞增殖与应激反应的信号网络发生交叉。多种疾病背景中均有关于 TMEM19 转录水平变化的报道（包括与癌症相关的表达特征），这支持其作为细胞状态潜在调节因子的研究价值。这些特征使 TMEM19 成为研究人类细胞中膜相关调控机制及通路串扰的一个有用靶点。
TMEM19 双切酶质粒（h）由一对匹配的质粒组成，专为在 human 细胞系中对 TMEM19 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对TMEM19内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时，会产生错位的单链切口，从而共同形成错位双链断裂，这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径（最常见的是非同源末端连接（NHEJ））得到修复，从而导致插入或缺失，进而破坏TMEM19的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合，双切口方法提高了编辑特异性，并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞，其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化，而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集，并简化了TMEM19基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。