Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
TIM Antibody (H-11): sc-166785. Near-infrared western blot analysis of TIM expression in HeLa (A), SK-BR-3 (B), K-562 (C) and Hep G2 (D) whole cell lysates. Blocked with UltraCruz® Blocking Reagent: sc-516214. Detection reagent used: m-IgGκ BP-CFL 790: sc-516181.
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TIM双切口酶质粒(h): sc-416503-NIC
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- TIM 双切口酶质粒（h）含有一对质粒，分别编码D10A突变的Cas9核酸酶，和目标特异的 20 nt 向导RNA （gRNA），与其相应的/%base_sku_name%/ CRISPR/Cas9敲除质粒相比，它在基因敲除方面具有更好的特异性
- 成对的向导RNA序列与目标基因中约20个碱基对互补，从而使Cas9可以模仿DNA双链断裂（DSB），介导特异的基因组DNA双切割
- 质粒对中的一个包含供筛选使用的嘌呤霉素抗性基因；另一个包含供观察转染使用的绿色荧光蛋白标记
- TIM双切酶质粒（h）和TIM双切酶质粒（h2）编码针对TPI1的不同配对gRNA设计。其中一种或两种设计可能均有提供
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：TIM: sc-166785，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
TIM双切口酶质粒(h) | sc-416503-NIC | 20 µg | CNY3084.00 |
人类 TPI1 基因编码丙糖磷酸异构酶（TIM），这是一种位于细胞质的糖酵解酶，催化二羟基丙酮磷酸与甘油醛-3-磷酸之间的相互转化。该步骤有助于维持高效的糖酵解通量，并将碳水化合物代谢与下游 ATP 生成、氧化还原平衡以及磷酸戊糖途径等生物合成通路连接起来。TPI1 的活性参与细胞能量稳态的维持，并与增殖状态及应激适应状态下常见的代谢重编程相关，因此在研究缺氧反应和中心碳代谢时具有重要意义。遗传性 TPI1 缺陷与溶血性贫血和神经肌肉功能障碍相关；此外，在癌症代谢研究中，涉及 TPI1 的糖酵解调控改变也经常被重点探讨。
TIM 双切酶质粒（h）由一对匹配的质粒组成，专为在 human 细胞系中对 TPI1 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对TPI1内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时，会产生错位的单链切口，从而共同形成错位双链断裂，这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径（最常见的是非同源末端连接（NHEJ））得到修复，从而导致插入或缺失，进而破坏TPI1的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合，双切口方法提高了编辑特异性，并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞，其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化，而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集，并简化了TPI1基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。