非 CRISPR 数据：图片说明了可视化 CRISPR 实验结果的抗体质量。
TIM 抗体 (H-11) HRP: sc-166785 HRP. 直接 Western 印迹分析 HeLa (A), Hep G2 (B), K-562 (D) 和 Sol8 (E) 全细胞裂解液及 HeLa 核提取物 (C) 中 TIM 的表达.
非 CRISPR 数据：图片说明了可视化 CRISPR 实验结果的抗体质量。
非 CRISPR 数据：图片说明了可视化 CRISPR 实验结果的抗体质量。
TIM CRISPR/Cas9 KO质粒 (m): sc-423480
- 针对种属：mouse
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- TIM CRISPR/Cas9 基因敲除（KO）质粒（m） 是一组质粒混合物，每种质粒均编码 Cas9 核酸酶及针对特定靶点的 20 核苷酸引导 RNA（gRNA），其设计基于 GeCKO v2 文库中的序列，旨在实现最高的基因敲除效率
- gRNA序列引导Cas9在TIM基因组位点诱导位点特异性双链断裂（DSBs），从而通过非同源末端连接（NHEJ）实现基因敲除
- 嘌呤霉素抗性基因和 RFP 基因两侧有 LoxP 位点，因此在建立稳定的基因敲除细胞系后，可以通过 Cre 重组酶（Cre 向量：sc-418923）去除选择标记。
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：TIM: sc-166785，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
TIM CRISPR/Cas9 KO质粒 (m) | sc-423480 | 20 µg | CNY2986.00 |
概述
小鼠 Tpi1 编码丙糖磷酸异构酶（triosephosphate isomerase，TIM），这是糖酵解通路中的关键核心酶，催化二羟基丙酮磷酸与甘油醛-3-磷酸之间的可逆相互转化。通过维持糖酵解的高效通量，TIM 支持细胞 ATP 生成、氧化还原平衡，并与磷酸戊糖途径以及补充性进入三羧酸循环（TCA）的代谢输入等通路实现代谢耦联。因此，Tpi1 活性对于增殖与分化组织的生物能量稳态至关重要；其失调也与代谢应激反应、低氧适应以及糖酵解依赖性表型等研究密切相关。涉及 Tpi1 的糖酵解调控改变，也常在神经功能障碍、溶血性病理以及癌症相关的代谢重编程模型中被研究。
TIM CRISPR/Cas9 KO质粒（m）是一组旨在针对性地破坏mouse细胞系中Tpi1基因的质粒池。每条质粒均共表达一种独特的单引导RNA（sgRNA），该sgRNA针对Tpi1基因内的特定位点，并携带来自化脓性链球菌的Cas9核酸酶。这些质粒还编码GFP，可通过荧光显微镜或流式细胞术对成功转染的细胞进行荧光标记和富集。
多引导设计提高了在Cas9介导的双链断裂形成后，产生破坏Tpi1开放阅读框的插入或缺失（indels）的概率。CRISPR/Cas9系统引入的DNA断裂通过内源性非同源末端连接（NHEJ）途径修复，通常会导致移码突变，从而使TIM蛋白表达失活。
该CRISPR敲除系统能够高效构建Tpi1缺失的细胞模型，用于TIM信号传导研究、功能基因组学研究、癌症生物学研究以及人类细胞系中治疗反应的评估。
主要特点
- 针对对 TIM 功能至关重要的 Tpi1 外显子的 sgRNA
通过单质粒共表达 SpCas9 和 sgRNA 以简化递送过程
GFP 报告基因用于识别转染细胞
针对多个 Tpi1 基因组位点的质粒池以提高敲除效率
兼容转染递送
设计变体
CRISPRs +/- HDR
- 由 TIM CRISPR/Cas9 KO 质粒 (m) 和 TIM CRISPR/Cas9 KO 质粒 (m2) 编码的 gRNA 分别靶向 Tpi1 基因座内的不同位点。可能提供其中一种或两种靶向设计。具体供应情况请参见相关产品。
由 TIM HDR 质粒（m）编码的 HDR 供体构建体以及 TIM HDR质粒（m2）编码的HDR供体构建体包含一个嘌呤霉素抗性盒和一个RFP报告基因，其两侧由Tpi1同源臂包围，以支持在与CRISPR/Cas9敲除设计对应的特定Tpi1靶位点进行同源导向修复。HDR供体的供应情况可能有所不同。请查看“相关产品”了解供应情况。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。