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TICAM-1CRISPR激活质粒(h) | sc-414627-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
TICAM1 编码 TICAM-1(也称 TRIF),是先天免疫信号通路中位于 TLR3 和 TLR4 下游的关键衔接蛋白,可将模式识别受体的激活与依赖 IRF3/IRF7 及 NF-κB 的转录程序连接起来。TICAM-1 通过招募 TBK1 和 IKKε,并与 TRAF/RIPK1 等信号节点整合,协调 I 型干扰素产生、炎性细胞因子诱导以及程序性细胞死亡相关通路。TICAM1 信号失调与抗病毒反应改变和异常炎症有关,且常在免疫介导性疾病与感染性疾病的研究中被重点考察。因此,TICAM1 被广泛用作解析 TLR 依赖的先天免疫通路及其与细胞应激和细胞因子网络串扰的机制抓手。
TICAM-1 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性TICAM1的表达。
TICAM-1 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的TICAM1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于TICAM1转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性TICAM-1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的TICAM1位点,并能够研究内源性位点上依赖于TICAM-1的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在TICAM1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟TICAM-1通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。