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TGR5慢病毒激活颗粒(h) | sc-401875-LAC | 200 µl | $455.00 |
人类 GPBAR1 编码胆汁酸反应性的 G 蛋白偶联受体 TGR5。TGR5 是一种膜受体,主要与 Gαs 耦联,从而升高 cAMP 并激活与 PKA/CREB 相关的转录程序。TGR5 将胆汁酸与脂质信号整合进细胞过程之中,这些过程包括能量消耗、线粒体活性以及炎症水平,并在多种组织中调控分泌与屏障功能。其下游效应与代谢和免疫通路发生交叉,包括对细胞因子信号以及 GLP-1 等内分泌介质的调控,因此 GPBAR1 是研究代谢功能障碍与炎症相关疾病机制中的一个重要节点。关于 GPBAR1/TGR5 活性与表达改变的研究,已涉及胆汁淤积性肝脏生物学、肠道稳态以及心代谢风险相关通路等背景。
TGR5 慢病毒激活颗粒(h)通过将完整的协同激活介导体(SAM)转录激活系统包装到可直接转导的高滴度慢病毒颗粒中,满足了这一需求,从而能够在更广泛的人类细胞类型中高效上调 GPBAR1 表达。
TGR5 慢病毒激活颗粒(h)通过慢病毒转导递送协同激活介导体(SAM)系统的所有功能组分。该系统包含三种共同转导至靶细胞的颗粒制剂:一种编码与VP64转激活域融合的无催化活性的dCas9(D10A和N863A突变),并携带布拉西定抗性基因; 一种编码MS2-p65-HSF1融合蛋白并携带潮霉素抗性基因的制剂;以及一种编码靶标特异性20 nt sgRNA(与两个MS2 RNA适配体融合)并携带嘌呤霉素抗性基因的制剂。经过慢病毒转导和表达盒的基因组整合后,SAM组分得以稳定表达,并在GPBAR1转录起始位点上游的近端启动子区域内的靶位点组装。在此处,VP64、p65和HSF1协同作用,招募内源性转录 machinery,从而驱动内源性TGR5表达的持续上调。使用无核酸酶活性的 dCas9 可避免引入双链 DNA 断裂,并保留原生的 GPBAR1 基因组位点和调控架构。
慢病毒载体具有多项实用优势:稳定的基因组整合支持细胞分裂过程中的可遗传激活;高滴度颗粒制剂免去了内部病毒生产的需要;且与原代细胞、非增殖细胞及转染抗性细胞类型的兼容性,扩大了实验的可及性。可通过嘌呤霉素、潮霉素和布拉西定进行三重抗生素筛选,以确认并富集成功的转导。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。