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Tenascin-CCRISPR激活质粒(h) | sc-400663-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
TNC 编码 Tenascin‑C(腱生蛋白C),是一种大型细胞外基质糖蛋白,在发育过程中、组织重塑及炎症反应中呈动态表达。Tenascin‑C 通过与整合素(integrins)、syndecans 及其他基质成分相互作用,调控细胞黏附、迁移与机械信号转导,从而影响黏着斑信号传递与细胞骨架组织。它塑造细胞外生态位,并可调节生长因子的可用性,参与上皮–间质转化、血管生成性重塑以及免疫细胞迁移等过程。TNC 表达与基质沉积的失调与纤维化及肿瘤相关基质重塑有关,因此可作为研究由微环境驱动的细胞行为的一个有价值的分子切入点。
Tenascin-C CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性TNC的表达。
Tenascin-C CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的TNC基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于TNC转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性Tenascin-C表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的TNC位点,并能够研究内源性位点上依赖于Tenascin-C的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在TNC表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Tenascin-C通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。