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TecCRISPR激活质粒(h) | sc-402051-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
人类 TEC 基因编码 Tec 蛋白,属于 Tec 家族的非受体型酪氨酸激酶,负责将免疫受体(包括 B 细胞受体和 Fc 受体)下游的信号向内传导。Tec 可整合多种磷酸化事件,影响磷脂酶 C-γ 的激活、钙离子通量、PI3K–AKT 信号以及 MAPK 通路,从而塑造淋巴细胞的激活、分化与细胞因子反应。TEC 相关信号的失调与异常免疫细胞功能及炎症表型有关,因此 TEC 是研究受体近端激酶网络的一个有用节点。TEC 也常被用作系统层面分析中评估免疫信号串扰与转录重塑的通路读出指标。
Tec CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性TEC的表达。
Tec CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的TEC基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于TEC转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性Tec表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的TEC位点,并能够研究内源性位点上依赖于Tec的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在TEC表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Tec通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。