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Tctex1CRISPR激活质粒(h) | sc-402886-ACT | 20 µg | CNY2986.00 | |||
Tctex1CRISPR激活质粒(h2) | sc-402886-ACT-2 | 20 µg | CNY2986.00 |
人类 DYNLT1 基因编码 Tctex1,这是一种动力蛋白轻链,可与细胞质动力蛋白组装,支持基于微管的运输、细胞器定位以及细胞内转运。通过在动力蛋白–dynactin 马达复合体中的相互作用,Tctex1 参与有丝分裂纺锤体组织、中心体功能以及货物移动等过程,从而影响细胞极性与细胞分裂。DYNLT1 依赖的运输还通过调控蛋白定位与信号在细胞内的区室化,与神经元与纤毛生物学相关。由于动力蛋白相关运输通路的失调常在神经退行性机制与异常增殖状态的研究中被关注,DYNLT1 也成为探究细胞骨架动力学及其信号输出的一个重要节点。
Tctex1 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性DYNLT1的表达。
Tctex1 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的DYNLT1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于DYNLT1转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性Tctex1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的DYNLT1位点,并能够研究内源性位点上依赖于Tctex1的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在DYNLT1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Tctex1通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。