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TBX18CRISPR激活质粒(h) | sc-401564-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
TBX18 编码一种 T-box 家族转录因子,通过调控谱系特化与间充质分化程序,指导胚胎发育过程中的模式建立与器官发生。在人类发育中,TBX18 与泌尿生殖系统和肌肉骨骼系统的形态建成密切相关,并可通过对发育基因网络的转录调控,参与心脏传导系统的形成。其活性还与塑造组织边界和细胞命运决定的信号过程相互交织,包括受 WNT、BMP 和 FGF 等信号线索影响的通路。TBX18 的表达或功能失调与先天性发育异常有关,因此可作为研究器官发育及疾病相关表型背后转录调控回路的一个重要节点。
TBX18 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性TBX18的表达。
TBX18 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的TBX18基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于TBX18转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性TBX18表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的TBX18位点,并能够研究内源性位点上依赖于TBX18的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在TBX18表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟TBX18通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。