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SUMO-4CRISPR激活质粒(h) | sc-403123-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
人类 SUMO4 基因编码 SUMO-4,这是一种小型类泛素修饰蛋白,可通过 SUMO 化(SUMOylation)调控蛋白功能,从而影响其亚细胞定位、稳定性及相互作用网络。SUMO-4 依赖的翻译后修饰与应激响应信号传导以及转录程序的调控相关,包括汇聚至 NF-κB 与先天免疫调节的通路。通过微调 SUMO 化动力学,SUMO-4 能影响免疫组织和代谢活跃组织中的蛋白质稳态(proteostasis)以及炎症信号的触发阈值。SUMO4 的变异已在自身免疫与炎症性疾病生物学背景下被研究,因此它也是用于解析免疫信号与细胞应激反应机制的一个有价值靶点。
SUMO-4 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性SUMO4的表达。
SUMO-4 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的SUMO4基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于SUMO4转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性SUMO-4表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的SUMO4位点,并能够研究内源性位点上依赖于SUMO-4的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在SUMO4表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟SUMO-4通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。