Stim1CRISPR激活质粒(h): sc-401311-ACT

STIM1 编码基质相互作用分子 1（Stim1），这是一种内质网 Ca2+ 传感器，可通过在内质网–质膜接触位点将内质网钙库耗竭与 ORAI 通道的激活相耦联，从而启动储存操纵性钙进入（SOCE）。这一钙信号轴协调胞质 Ca2+ 振荡，并通过包括钙调神经磷酸酶–NFAT 与 MAPK 在内的信号通路，调控转录程序、细胞骨架重塑、分泌以及细胞周期进程。STIM1 依赖的 SOCE 是免疫细胞激活以及多种组织中更广泛钙稳态维持的关键决定因素。STIM1 活性及 Ca2+ 内流动力学的失调与炎症信号改变、神经肌肉功能异常以及与癌症相关的表型（如迁移与代谢适应）有关，因此可作为疾病建模中的一个机制性枢纽。

Stim1 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性STIM1的表达。

Stim1 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的STIM1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于STIM1转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性Stim1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的STIM1位点，并能够研究内源性位点上依赖于Stim1的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在STIM1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Stim1通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。