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STC2CRISPR激活质粒(h) | sc-405292-ACT | 20 µg | CNY2986.00 | |||
STC2CRISPR激活质粒(h2) | sc-405292-ACT-2 | 20 µg | CNY2986.00 |
人类 STC2(stanniocalcin 2)编码一种分泌型糖蛋白激素,参与钙/磷稳态维持以及细胞对压力的适应。STC2 的表达受缺氧和内质网应激通路调控,并通过依赖具体情境的信号网络与细胞增殖、凋亡及代谢重塑的调节相关。在多种疾病背景中均有 STC2 水平失调的报道,包括肿瘤生物学以及心脏代谢和炎症过程;在这些研究中,STC2 常被作为应激反应性介质进行探讨。这些特性使 STC2 成为解析分泌因子信号传导、应激通路串扰以及与微环境适应相关表型的有用靶点。
STC2 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性STC2的表达。
STC2 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的STC2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于STC2转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性STC2表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的STC2位点,并能够研究内源性位点上依赖于STC2的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在STC2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟STC2通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。