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StARD4CRISPR激活质粒(h) | sc-403624-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
人类 STARD4 基因编码 StARD4 蛋白,这是一种含 START 结构域的脂质转运蛋白,可结合胆固醇并支持细胞内膜之间的非囊泡甾醇转运。StARD4 通过影响甾醇分布来维持胆固醇稳态,这种分布会反馈到以内质网(ER)为基础的感知与生物合成调控中,包括 SREBP 依赖的脂质代谢通路中的关键调控节点。通过塑造细胞内胆固醇库,StARD4 能影响膜成分、脂滴动态,以及与代谢适应相关的信号过程。胆固醇处理失衡与心代谢表型及脂质相关应激反应密切相关,因此 STARD4 是研究甾醇生物学机制及相关疾病通路的一个有价值靶点。
StARD4 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性STARD4的表达。
StARD4 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的STARD4基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于STARD4转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性StARD4表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的STARD4位点,并能够研究内源性位点上依赖于StARD4的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在STARD4表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟StARD4通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。