SR-2BCRISPR激活质粒(m): sc-420994-ACT
- 针对种属：mouse
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- SR-2B CRISPER激活质粒（m）是一种协同激活介质（SAM）转录激活系统，目的在于特定上调基因表达
- SR-2B CRISPR 激活质粒 (m)包含三种质量比为1:1:1的质粒：一种质粒编码与转录激活结构域VP64融合的去活化的Cas9 (dCas9)核酸酶(D10A and N863A)，和杀稻瘟素抗性基因；一种质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白，和潮霉素抗性基因；一种质粒编码与两个MS2 RNA适体融合的目标特异的20 nt向导RNA，和嘌呤霉素抗性基因。
- 形成的SAM复合物结合到转录起始位点上游大约200-250 nt的特定位点区域，为高效激活基因提供转录因子的招募
- 由 SR-2B CRISPR 激活质粒 (m) 和 SR-2B CRISPR 激活质粒 (m2) 编码的 gRNA 分别针对 Htr2b 转录起始位点上游的不同调控区域。其中一种或两种设计可能可用
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：SR-2B: sc-376878，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
SR-2BCRISPR激活质粒(m) | sc-420994-ACT | 20 µg | CNY2986.00 | |||
SR-2BCRISPR激活质粒(m2) | sc-420994-ACT-2 | 20 µg | CNY2986.00 |
小鼠 Htr2b 编码 5-羟色胺受体 SR-2B（5-HT2B），这是一种 G 蛋白偶联受体（GPCR），主要通过 Gq/11 介导信号传导，激活磷脂酶 C，促进肌醇磷酸周转、细胞内 Ca²⁺ 动员，并启动下游由 PKC/ERK 驱动的转录程序。SR-2B 调节中枢神经调制及外周 5-羟色胺能信号，从而影响神经元兴奋性、血管张力以及组织重塑反应。Htr2b 活性改变与 5-羟色胺通路输出失衡相关，这些失衡与神经行为表型、心血管与肺部重塑过程以及炎症信号环境有关。作为膜受体信号节点，SR-2B 为研究受体驱动的基因表达、第二信使耦联，以及与 MAPK 和钙依赖性网络的通路串扰提供了一个易于切入的研究入口。
SR-2B CRISPR激活质粒（m）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性Htr2b的表达。
SR-2B CRISPR激活质粒（m）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的Htr2b基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于Htr2b转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性SR-2B表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的Htr2b位点，并能够研究内源性位点上依赖于SR-2B的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在Htr2b表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟SR-2B通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。