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SPRR2GCRISPR激活质粒(h) | sc-416907-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
SPRR2G(small proline-rich protein 2G,小富脯氨酸富集蛋白2G)是一种角化包膜(cornified envelope)的前体蛋白,主要在复层上皮中表达。在角质形成细胞终末分化过程中,它作为转谷氨酰胺酶介导交联反应的底物,促进屏障结构的形成。SPRR2G参与表皮分化与角化程序,这些程序与细胞骨架重塑以及应激响应型上皮基因网络相互协调。SPRR家族成员的表达异常常见于屏障受损的炎症性皮肤疾病和上皮过度增殖等情况;SPRR2G也常被用作反映分化状态与组织重塑的分子读出指标。因此,SPRR2G与研究上皮稳态、损伤应答以及疾病相关的分化通路改变密切相关。
SPRR2G CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性SPRR2G的表达。
SPRR2G CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的SPRR2G基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于SPRR2G转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性SPRR2G表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的SPRR2G位点,并能够研究内源性位点上依赖于SPRR2G的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在SPRR2G表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟SPRR2G通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。