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SPEC1CRISPR激活质粒(h) | sc-410599-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
人类 CDC42SE1 编码 SPEC1(CDC42 小效应蛋白 1),这是一种与 Cdc42 相互作用的效应蛋白,有助于将 Rho GTPase 信号与细胞骨架重塑和细胞极性建立相耦联。通过调控肌动蛋白(actin)动态及细胞连接结构的组织方式,SPEC1 可影响定向迁移、膜突起形成以及上皮结构等过程。该信号轴与调控黏附与运动性的通路相交汇,包括由 Rho 家族 GTPase 调控、塑造细胞形态与组织结构的网络。在与癌症生物学及其他上皮完整性障碍相关的异常迁移与侵袭表型研究中,Cdc42 效应程序的失调(包括 CDC42SE1 表达改变)常被重点考察。
SPEC1 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性CDC42SE1的表达。
SPEC1 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的CDC42SE1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于CDC42SE1转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性SPEC1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的CDC42SE1位点,并能够研究内源性位点上依赖于SPEC1的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在CDC42SE1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟SPEC1通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。