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SPAG5CRISPR激活质粒(h) | sc-403607-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
SPAG5(sperm-associated antigen 5,精子相关抗原5),又称 astrin,编码一种微管相关蛋白,定位于有丝分裂纺锤体和动粒,在其中支持染色体排列、纺锤体完整性以及姐妹染色单体的准确分离。SPAG5 参与动粒-微管附着动态与纺锤体组装检查点调控等核心有丝分裂控制过程,因此与细胞周期进程和增殖能力密切相关。SPAG5 表达失调常在肿瘤生物学研究中被重点关注,因为这些情境通常伴随有丝分裂压力、染色体不稳定性及增殖改变。因此,SPAG5 被广泛用作研究有丝分裂、基因组稳定性以及细胞分裂调控通路的靶点。
SPAG5 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性SPAG5的表达。
SPAG5 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的SPAG5基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于SPAG5转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性SPAG5表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的SPAG5位点,并能够研究内源性位点上依赖于SPAG5的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在SPAG5表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟SPAG5通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。