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Sp2CRISPR激活质粒(h) | sc-405026-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
人类 SP2 基因编码 Sp2 蛋白,这是一种广泛表达的 Sp/KLF 家族转录因子,可结合富含 GC 的启动子元件,调控参与细胞周期推进、染色质组织以及代谢稳态等基因的基础转录。Sp2 的活性与 RNA 聚合酶 II 依赖的转录调控相互衔接,并可通过启动子结构与表观遗传状态所决定的机制影响基因调控网络。Sp 家族转录程序的失调与增殖异常及应激反应信号改变有关,因此有必要在诸如肿瘤相关的转录重编程、谱系特异性分化缺陷等背景下研究 SP2。作为一种核内 DNA 结合型调控因子,Sp2 常被用于研究其在启动子占据、转录因子互作以及下游通路调制中的作用。
Sp2 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性SP2的表达。
Sp2 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的SP2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于SP2转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性Sp2表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的SP2位点,并能够研究内源性位点上依赖于Sp2的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在SP2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Sp2通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。