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Sox-7CRISPR激活质粒(m) | sc-423091-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
小鼠 Sox7 编码转录因子 Sox-7,它是 SOX F 组成员之一,在发育过程中调控内皮分化、血管形态发生以及细胞身份的维持。Sox-7 参与的转录程序与血管生成信号和血管稳态相互交织,包括与 Wnt/β-连环蛋白通路及 Notch 相关通路的串扰。SOX7 活性异常与内皮基因表达失调及异常血管形成有关,因此与发育缺陷和血管相关疾病机制研究密切相关。除在内皮中的作用外,Sox-7 还可影响上皮–间质调控网络以及用于模拟组织重塑的谱系指定程序。
Sox-7 CRISPR激活质粒(m)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性Sox7的表达。
Sox-7 CRISPR激活质粒(m)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的Sox7基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于Sox7转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性Sox-7表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的Sox7位点,并能够研究内源性位点上依赖于Sox-7的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在Sox7表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Sox-7通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。