SOSTDC1CRISPR激活质粒(h): sc-403398-ACT

人类 SOSTDC1 基因编码含骨硬化蛋白结构域蛋白 1（sclerostin domain-containing protein 1），这是一种分泌型的 BMP 与 Wnt 信号通路拮抗因子，可通过调节受体–配体相互作用来限制通路活性。SOSTDC1 通过减弱 BMP 驱动的 SMAD 信号并影响依赖 β-连环蛋白（β-catenin）的转录，参与发育模式建立、成骨分化以及组织稳态的调控。在多种生长因子信号失衡的情境中（包括肿瘤以及纤维化或组织重塑相关状态），均有关于 SOSTDC1 表达改变的报道；在这些情况下，BMP/Wnt 的平衡会影响细胞增殖、分化以及细胞外基质相关程序。作为一种可溶性的通路调控因子，SOSTDC1 常用于研究旁分泌信号、上皮–间质互作以及依赖微环境的表型。

SOSTDC1 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性SOSTDC1的表达。

SOSTDC1 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的SOSTDC1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于SOSTDC1转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性SOSTDC1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的SOSTDC1位点，并能够研究内源性位点上依赖于SOSTDC1的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在SOSTDC1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟SOSTDC1通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。