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SLC35F2CRISPR激活质粒(h) | sc-406765-ACT | 20 µg | CNY2986.00 | |||
SLC35F2CRISPR激活质粒(h2) | sc-406765-ACT-2 | 20 µg | CNY2986.00 |
SLC35F2(溶质载体家族35成员F2)是一种人源多跨膜转运蛋白,参与细胞对小分子的摄取及其在细胞内的处理;已有研究报道其与膜运输(membrane trafficking)以及外源性化合物(xenobiotic)的转运过程相关。作为SLC35家族成员,SLC35F2常在转运体生物学、细胞对特定化合物的敏感性,以及决定细胞内暴露水平、从而影响应激反应与存活通路的因素等研究背景下被关注。转录组数据集中,SLC35F2表达改变与癌症相关表型存在关联,并且在肿瘤细胞模型中,SLC35F2也经常被用来评估其作为药物反应与代谢脆弱性的功能调节因子。这些特性使SLC35F2成为研究“转运相关信号传导”、细胞适应性(fitness)以及在化学或遗传扰动下通路重编程(pathway rewiring)的有用靶点。
SLC35F2 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性SLC35F2的表达。
SLC35F2 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的SLC35F2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于SLC35F2转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性SLC35F2表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的SLC35F2位点,并能够研究内源性位点上依赖于SLC35F2的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在SLC35F2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟SLC35F2通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。