SLC17A9CRISPR激活质粒(h): sc-403175-ACT
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- SLC17A9 CRISPER激活质粒（h）是一种协同激活介质（SAM）转录激活系统，目的在于特定上调基因表达
- SLC17A9 CRISPR 激活质粒 (h)包含三种质量比为1:1:1的质粒：一种质粒编码与转录激活结构域VP64融合的去活化的Cas9 (dCas9)核酸酶(D10A and N863A)，和杀稻瘟素抗性基因；一种质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白，和潮霉素抗性基因；一种质粒编码与两个MS2 RNA适体融合的目标特异的20 nt向导RNA，和嘌呤霉素抗性基因。
- 形成的SAM复合物结合到转录起始位点上游大约200-250 nt的特定位点区域，为高效激活基因提供转录因子的招募
- 由 SLC17A9 CRISPR 激活质粒 (h) 和 SLC17A9 CRISPR 激活质粒 (h2) 编码的 gRNA 分别针对 SLC17A9 转录起始位点上游的不同调控区域。其中一种或两种设计可能可用
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SLC17A9CRISPR激活质粒(h) | sc-403175-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
SLC17A9 编码一种囊泡核苷酸转运蛋白（VNUT），可将 ATP 及其他核苷酸装载入分泌囊泡，从而使细胞在刺激下能够进行受调控的嘌呤能信号传导。通过控制囊泡内 ATP 的储存与释放，SLC17A9 会影响细胞外核苷酸水平，并调控下游由 P2 受体介导的通路，这些通路参与塑造钙离子动态、分泌过程、与炎性小体相关的反应以及细胞间通讯。相关研究表明，在嘌呤能信号异常并导致炎症信号失衡、疼痛处理改变以及肿瘤相关微环境重塑等情境中，SLC17A9 的活性具有重要作用。因此，调控 SLC17A9 的表达对于囊泡生物学机制研究、核苷酸依赖的信号网络解析以及应激反应相关细胞表型研究具有意义。
SLC17A9 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性SLC17A9的表达。
SLC17A9 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的SLC17A9基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于SLC17A9转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性SLC17A9表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的SLC17A9位点，并能够研究内源性位点上依赖于SLC17A9的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在SLC17A9表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟SLC17A9通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。