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SIRT5双切口酶质粒(h) | sc-416994-NIC | 20 µg | CNY3084.00 | |||
SIRT5双切口酶质粒(h2) | sc-416994-NIC-2 | 20 µg | CNY3084.00 |
SIRT5 编码一种位于线粒体内、依赖 NAD+ 的 sirtuin 去酰化酶,优先去除赖氨酸上的琥珀酰化、丙二酰化和戊二酰化修饰,从而在核心代谢过程中精细调节多种酶的活性。通过调控尿素循环、脂肪酸氧化以及氧化磷酸化等通路,SIRT5 有助于在营养供给与应激状态波动时维持线粒体稳态与氧化还原平衡。SIRT5 活性改变与代谢重编程、氧化应激反应以及线粒体功能障碍相关,这些现象在肿瘤研究与心脏-代谢疾病研究中均有报道。作为线粒体蛋白的翻译后调控因子,SIRT5 常被用于研究其对蛋白质组酰化状态及下游信号网络的影响,这些网络将能量状态与细胞适应性反应相耦联。
SIRT5 双切酶质粒(h)由一对匹配的质粒组成,专为在 human 细胞系中对 SIRT5 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对SIRT5内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏SIRT5的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了SIRT5基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。