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SHARPIN慢病毒激活颗粒(h) | sc-404836-LAC | 200 µl | CNY3422.00 |
SHARPIN(SHANK 相关 RH 结构域相互作用蛋白)是线性泛素链组装复合体(LUBAC)的核心组分,在其中与 RNF31/HOIP 和 RBCK1/HOIL-1L 协同作用,调控 Met1 连接型泛素化及其下游的 NF-κB 信号传导。通过调控 TNFR 等受体以及模式识别相关通路中的泛素依赖性信号,SHARPIN 有助于精细调节炎症反应、细胞存活程序和蛋白质稳态。研究还提示 SHARPIN 参与调控 PTEN/PI3K–AKT 信号,以及细胞骨架或黏附相关过程,从而与增殖、迁移和应激反应等表型相联系。因此,SHARPIN 活性失调常在慢性炎症、免疫信号缺陷以及癌症相关通路重编程等背景下被研究。
SHARPIN 慢病毒激活颗粒(h)通过将完整的协同激活介导体(SAM)转录激活系统包装到可直接转导的高滴度慢病毒颗粒中,满足了这一需求,从而能够在更广泛的人类细胞类型中高效上调 SHARPIN 表达。
SHARPIN 慢病毒激活颗粒(h)通过慢病毒转导递送协同激活介导体(SAM)系统的所有功能组分。该系统包含三种共同转导至靶细胞的颗粒制剂:一种编码与VP64转激活域融合的无催化活性的dCas9(D10A和N863A突变),并携带布拉西定抗性基因; 一种编码MS2-p65-HSF1融合蛋白并携带潮霉素抗性基因的制剂;以及一种编码靶标特异性20 nt sgRNA(与两个MS2 RNA适配体融合)并携带嘌呤霉素抗性基因的制剂。经过慢病毒转导和表达盒的基因组整合后,SAM组分得以稳定表达,并在SHARPIN转录起始位点上游的近端启动子区域内的靶位点组装。在此处,VP64、p65和HSF1协同作用,招募内源性转录 machinery,从而驱动内源性SHARPIN表达的持续上调。使用无核酸酶活性的 dCas9 可避免引入双链 DNA 断裂,并保留原生的 SHARPIN 基因组位点和调控架构。
慢病毒载体具有多项实用优势:稳定的基因组整合支持细胞分裂过程中的可遗传激活;高滴度颗粒制剂免去了内部病毒生产的需要;且与原代细胞、非增殖细胞及转染抗性细胞类型的兼容性,扩大了实验的可及性。可通过嘌呤霉素、潮霉素和布拉西定进行三重抗生素筛选,以确认并富集成功的转导。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。