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Sgo2CRISPR激活质粒(h) | sc-404058-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
人类 SGO2 基因编码 shugoshin 2(Sgo2),这是一种与着丝粒相关的 cohesin 保护因子,有助于在有丝分裂和减数分裂过程中维持姐妹染色单体黏连,并确保染色体准确分离。Sgo2 在动粒–着丝粒调控中发挥作用,与依赖磷酸酶的信号通路协同,拮抗 cohesin 的过早释放,并支持正确的纺锤体附着和检查点的可靠性。SGO2 调控的黏连动态一旦受扰,可能促进染色体不稳定性和非整倍体的产生;这些过程常与肿瘤生物学及发育障碍相关。因此,SGO2 常被用于研究细胞周期控制、DNA 损伤应答与基因组维护等相关通路。
Sgo2 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性SGO2的表达。
Sgo2 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的SGO2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于SGO2转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性Sgo2表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的SGO2位点,并能够研究内源性位点上依赖于Sgo2的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在SGO2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Sgo2通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。