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SETD4CRISPR激活质粒(h) | sc-403788-ACT | 20 µg | CNY2986.00 | |||
SETD4CRISPR激活质粒(h2) | sc-403788-ACT-2 | 20 µg | CNY2986.00 |
人类 SETD4 编码一种含 SET 结构域的蛋白,参与依赖赖氨酸甲基化的染色质结构与转录程序调控。作为一种推定的表观遗传“写入酶”,SETD4 常在染色质重塑、细胞周期控制以及谱系相关基因表达等背景下被研究;在这些过程中,甲基化动力学的改变可重塑细胞状态。关于 SETD4 表达或活性失调的研究,已将其与增殖表型以及与癌症生物学和其他存在表观遗传扰动的疾病相关的转录重编程联系起来。这些特征使 SETD4 成为用于机制研究的有价值靶点,可帮助阐明染色质相关信号与基因调控网络之间的联系。
SETD4 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性SETD4的表达。
SETD4 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的SETD4基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于SETD4转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性SETD4表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的SETD4位点,并能够研究内源性位点上依赖于SETD4的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在SETD4表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟SETD4通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。