Serpinb3aCRISPR激活质粒(m): sc-422808-ACT
- 针对种属：mouse
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- Serpinb3a CRISPER激活质粒（m）是一种协同激活介质（SAM）转录激活系统，目的在于特定上调基因表达
- Serpinb3a CRISPR 激活质粒 (m)包含三种质量比为1:1:1的质粒：一种质粒编码与转录激活结构域VP64融合的去活化的Cas9 (dCas9)核酸酶(D10A and N863A)，和杀稻瘟素抗性基因；一种质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白，和潮霉素抗性基因；一种质粒编码与两个MS2 RNA适体融合的目标特异的20 nt向导RNA，和嘌呤霉素抗性基因。
- 形成的SAM复合物结合到转录起始位点上游大约200-250 nt的特定位点区域，为高效激活基因提供转录因子的招募
- 由 Serpinb3a CRISPR 激活质粒 (m) 和 Serpinb3a CRISPR 激活质粒 (m2) 编码的 gRNA 分别针对 Serpinb3a 转录起始位点上游的不同调控区域。其中一种或两种设计可能可用
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Serpinb3aCRISPR激活质粒(m) | sc-422808-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
小鼠 Serpinb3a 编码一类 B 型谱系的丝氨酸蛋白酶抑制剂（serpin），参与调控细胞内蛋白酶活性、细胞应激反应以及上皮稳态。作为一种细胞内 serpin，Serpinb3a 可影响与炎症、组织重塑和屏障完整性相关的蛋白酶依赖性过程，并与调节细胞凋亡、氧化应激适应和免疫信号传导的通路发生交叉。serpin 家族成员的表达异常与炎症微环境失衡及上皮损伤表型相关，因此 Serpinb3a 可作为研究情境依赖性应激与蛋白质稳态调控程序的有用分子节点。在小鼠模型中，Serpinb3a 的表达动态常用于评估组织损伤、纤维化重塑以及免疫介导的病理过程；在这些过程中，蛋白酶—抗蛋白酶平衡是决定细胞结局的关键因素。
Serpinb3a CRISPR激活质粒（m）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性Serpinb3a的表达。
Serpinb3a CRISPR激活质粒（m）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的Serpinb3a基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于Serpinb3a转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性Serpinb3a表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的Serpinb3a位点，并能够研究内源性位点上依赖于Serpinb3a的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在Serpinb3a表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Serpinb3a通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。