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SELHCRISPR激活质粒(h) | sc-415276-ACT | 20 µg | CNY2986.00 | |||
SELHCRISPR激活质粒(h2) | sc-415276-ACT-2 | 20 µg | CNY2986.00 |
人类基因 SELENOH 编码硒蛋白 H(SELH),这是一种具有氧化还原活性并与细胞核相关的蛋白质,被认为可通过依赖巯基的抗氧化过程维持细胞氧化还原稳态。SELH 参与细胞对氧化应激的响应,并支持在氧化还原挑战条件下影响 DNA 完整性、线粒体功能和蛋白质稳态的转录程序。作为更广泛的硒蛋白网络的一部分,该网络将硒代谢与活性氧(ROS)控制相耦联;当氧化信号与应激适应受到扰动时,SELH 活性的改变与神经退行性变、代谢功能障碍以及肿瘤生物学等机制相关。
SELH CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性SELENOH的表达。
SELH CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的SELENOH基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于SELENOH转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性SELH表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的SELENOH位点,并能够研究内源性位点上依赖于SELH的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在SELENOH表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟SELH通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。