SCAPCRISPR激活质粒(h): sc-401474-ACT

人源 SCAP（SREBF 伴侣蛋白）是一种内质网膜蛋白，作为固醇传感器以及 SREBP 转录因子的护送因子，促进其在调控下转运至高尔基体并通过蛋白水解被激活。通过 SCAP–SREBP 这一轴线，SCAP 调控负责胆固醇与脂肪酸生物合成、膜脂稳态以及对营养与固醇可用性变化的适应性反应等转录程序。SCAP 的活性与 INSIG 介导的滞留、内质网到高尔基体的转运，以及脂生成基因表达的反馈调控相互衔接。SCAP 依赖性信号的失调与代谢性疾病中观察到的脂质代谢异常相关，也与多种癌症情境下支持生长与应激适应的脂质重编程有关。

SCAP CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性SCAP的表达。

SCAP CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的SCAP基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于SCAP转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性SCAP表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的SCAP位点，并能够研究内源性位点上依赖于SCAP的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在SCAP表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟SCAP通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。